Onkoloģiskās zivis pārbauda jutīgu gēnu. FISH ir diferenciāldiagnostikas pētījums. Kā tiek veikts FISH tests
Mūsdienīga citoģenētiskās analīzes metode, kas ļauj noteikt kvalitatīvās un kvantitatīvās izmaiņas hromosomās (ieskaitot translokācijas un mikrodelēcijas) un tiek izmantota ļaundabīgu asins slimību un cietie audzēji.
Sinonīmi krievu
Fluorescējoša in situ hibridizācija
ZIVIS analīze
Angļu valodas sinonīmi
Fluorescence uz vietas hibridizācija
Pētījuma metode
Fluorescējoša in situ hibridizācija.
Kādu biomateriālu var izmantot pētījumiem?
Audu paraugs, audu paraugs parafīna blokā.
Kā pareizi sagatavoties pētījumam?
Nav nepieciešama sagatavošana.
Vispārīga informācija par pētījumu
Fluorescences in situ hibridizācija (FISH, no angļu valodas fluorescences iekšā- situ hibridizācija) ir viena no visvairāk mūsdienīgas metodes hromosomu anomāliju diagnostika. Tas ir balstīts uz fluorescējoši iezīmētu DNS zondu izmantošanu. DNS zondes ir īpaši sintezēti DNS fragmenti, kuru secība papildina pētāmo aberanto hromosomu DNS secību. Tādējādi DNS zondes atšķiras pēc sastāva: dažādu, specifisku DNS zondu izmanto dažādu hromosomu patoloģiju noteikšanai. Arī DNS zondes ir dažāda lieluma: dažas var novirzīt uz veselu hromosomu, citas uz noteiktu lokusu.
Hibridizācijas procesā, atrodoties novirzošām hromosomām pētāmajā paraugā, tās saistās ar DNS zondi, kuru, pārbaudot, izmantojot fluorescences mikroskopu, nosaka kā fluorescējošu signālu (pozitīvs FISH testa rezultāts). Ja nav aberantu hromosomu, nesaistītie DNS paraugi reakcijas laikā tiek "nomazgāti", ko, pārbaudot, izmantojot fluorescences mikroskopu, definē kā fluorescējoša signāla neesamību (FISH testa negatīvs rezultāts). Metode ļauj novērtēt ne tikai fluorescējoša signāla klātbūtni, bet arī tā intensitāti un lokalizāciju. Tādējādi FISH tests ir ne tikai kvalitatīva, bet arī kvantitatīva metode.
FISH testam ir vairākas priekšrocības salīdzinājumā ar citām citoģenētiskām metodēm. Pirmkārt, FISH pētījumu var piemērot gan metafāzes, gan starpfāžu kodoliem, tas ir, nedalošām šūnām. Šī ir galvenā FISH priekšrocība salīdzinājumā ar klasiskajām kariotipēšanas metodēm (piemēram, Romanovsky-Giemsa hromosomu krāsošana), kuras tiek piemērotas tikai metafāzes kodoliem. Pateicoties tam, FISH pētījums ir precīzāka metode hromosomu patoloģiju noteikšanai audos ar zemu proliferācijas aktivitāti, ieskaitot cietos audzējus.
Tā kā FISH testā tiek izmantota stabila starpfāžu kodolu DNS, pētniecībai var izmantot dažādus biomateriālus - smalkas leņķa aspirācijas biopsijas aspirācijas, uztriepes, kaulu smadzeņu aspirācijas, biopsijas un, kas ir svarīgi, konservētus audu fragmentus, piemēram, histoloģiskus blokus. Piemēram, FISH testu var veiksmīgi veikt atkārtotiem preparātiem, kas iegūti no piena dziedzeru biopsijas histoloģiskā bloka, apstiprinot krūts adenokarcinomas diagnozi un nepieciešamību noteikt audzēja HER2 / neu statusu. Jāuzsver, ka Šis brīdis FISH pētījums ir ieteicams kā apstiprinošs tests, kad tiek iegūts nenoteikts HER2 / neu audzēja marķiera (IHC 2+) audzēja imūnhistoķīmiskā pētījuma rezultāts.
Vēl viena FISH priekšrocība ir tā spēja identificēt mikrodelēcijas, kuras neatklāj ar klasisko kariotipizēšanu vai PCR. Tas ir īpaši svarīgi, ja ir aizdomas par DiGeorge sindromu un VCFS.
FISH testu plaši izmanto ļaundabīgu slimību diferenciāldiagnostikā, galvenokārt hematoloģijas onkoloģijā. Hromosomu anomālijas kombinācijā ar klīniskā aina un imūnhistoķīmisko pētījumu dati ir pamats limfocītu un mieloproliferatīvo slimību klasifikācijai, ārstēšanas taktikas noteikšanai un prognozēšanai. Klasiski piemēri ir hroniska mieloīdā leikēmija - t (9; 22), akūta promielocitārā leikēmija - t (15; 17), hroniska limfoleikoze- trisomija 12 un citi. Attiecībā uz cietajiem audzējiem krūts vēža diagnostikā visbiežāk izmanto FISH pētījumu, Urīnpūslis, resnās zarnas, neiroblastomas, retinoblastomas un citas.
FISH pētījumu var izmantot arī pirmsdzemdību un pirmsimplantācijas diagnostikā.
FISH testu bieži veic kombinācijā ar citām molekulārajām un citoģenētiskajām diagnostikas metodēm. Šī pētījuma rezultāts tiek vērtēts kopā ar papildu laboratorijas un instrumentālo datu rezultātiem.
Kāpēc tiek izmantoti pētījumi?
- Ļaundabīgo slimību (asins un cieto orgānu) diferenciāldiagnostikai.
Kad tiek plānots pētījums?
- Ja jums ir aizdomas par ļaundabīgu asins slimību vai cietu audzēju klātbūtni, kuru ārstēšanas taktika un prognoze ir atkarīga no audzēja klona hromosomu sastāva.
Ko nozīmē rezultāti?
Pozitīvs rezultāts:
- Aberantu hromosomu klātbūtne pētāmajā paraugā.
Negatīvs rezultāts:
- Pārmērīgu hromosomu trūkums testa paraugā.
Kas var ietekmēt rezultātu?
- Aberantu hromosomu skaits.
- Klīniskā materiāla imūnhistoķīmiskais pētījums (izmantojot 1 antivielu)
- Klīniskā materiāla imūnhistoķīmiskais pētījums (izmantojot 4 vai vairāk antivielas)
- HER2 audzēja statusa noteikšana ar FISH palīdzību
- HER2 audzēja stāvokļa noteikšana ar СISH metodi
Kas piešķir pētījumu?
Onkologs, pediatrs, akušieris-ginekologs, ģenētiķis.
Literatūra
- Wan TS, Ma ES. Molekulārā citoģenētika: neaizstājams līdzeklis vēža diagnostikā. Pretvēža rez. 2005. gada jūlijs-augusts; 25 (4): 2979-83.
- Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. Citogenētisko un molekulāro citoģenētisko pētījumu ietekme uz ļaundabīgām hematoloģiskām slimībām. Chang Gung Med J. 2012. gada marts-apr .; 35 (2): 96-110.
- Mühlmann M. Molekulārā citoģenētika metafāzes un starpfāzu šūnās vēža un ģenētisko pētījumu, diagnostikas un prognozes vajadzībām. Lietošana audu daļās un šūnu suspensijās. Genet Mol Res. 2002. gada 30. jūnijs; 1 (2): 117–27.
FISH krāsošanas metode (fluorescējoša in situ hibridizācija) tika izstrādāta Livermoras Nacionālajā laboratorijā (ASV) 1986. gadā. jauna metode hromosomu izpēte - DNS fluorescences noteikšanas metode, izmantojot hibridizāciju in situ ar specifiskām molekulārajām zondēm. Metode ir balstīta uz hromosomu DNS spēju noteiktos apstākļos saistīties ar DNS fragmentiem (DNS zondēm), kas ietver nukleotīdu sekvences, kas papildina hromosomu DNS. DNS zondes ir iepriekš marķētas ar īpašām vielām (piemēram, biotīnu vai digoksigenīnu). Hibridizācijai sagatavotus metafāzes hromosomu citoģenētiskos preparātus uzliek marķētas DNS zondes. Pēc hibridizācijas iestāšanās preparātus apstrādā ar īpašām fluorescējošām krāsvielām, kas konjugētas ar vielām, kas var selektīvi saistīties ar biotīnu vai digoksigenīnu. Katrai hromosomai ir noteikta krāsa. Hibridizāciju var veikt arī ar radioaktīvi iezīmētām zondēm. Citogenētisko analīzi veic fluorescējošā mikroskopā ultravioletajā gaismā.
FISH metodi izmanto nelielu svītrojumu un translokāciju noteikšanai. Hromosomu apmaiņas (translokācijas un dicentrikas) starp dažādu krāsu hromosomām ir viegli identificējamas kā daudzkrāsainas struktūras.
Darba beigas -
Šī tēma pieder sadaļai:
Apmācības modulis. Šūnu bioloģija
Augstākā profesionālā izglītība .. Baškīras Valsts medicīnas universitāte .. Veselības un sociālās attīstības ministrija ..
Ja jums nepieciešams papildu materiāls par šo tēmu vai arī jūs neatradāt meklēto, iesakām izmantot meklēšanu mūsu darbu datu bāzē:
Ko mēs darīsim ar saņemto materiālu:
Ja šis materiāls jums izrādījās noderīgs, varat to saglabāt savā lapā sociālajos tīklos:
| Čivināt |
Visas tēmas šajā sadaļā:
Apmācības modulis. Vispārējās un medicīniskās ģenētikas pamati
(metodiskie norādījumi studentiem) Akadēmiskā disciplīna Bioloģija Apmācības virzienam Vispārējā medicīna Ko
Laboratorijas darba projektēšanas noteikumi
Obligāts objekta mikroskopiskā pētījuma elements ir tā skice albumā. Skicēšanas mērķis ir labāk izprast un atmiņā nostiprināt objekta struktūru, atsevišķu struktūru formu
Praktiskais darbs
1. Pagaidu preparāta "Sīpolu plēves šūnas" sagatavošana Lai sagatavotu pagaidu preparātu ar sīpolu plēvi, noņemiet
Citoplazmas membrānu struktūra. Membrānu transporta funkcija
2. Mācīšanās mērķi: Zināt: - universālās bioloģiskās membrānas uzbūvi - vielu pasīvās transportēšanas modeļus caur membrānām
Eikariotu šūnu struktūra. Citoplazma un tās sastāvdaļas
2. Mācību mērķi: Zināt: - eikariotu šūnu organizācijas iezīmes - citoplazmas organoīdu struktūru un darbību
Organoīdi, kas iesaistīti vielu sintēzē
Jebkurā šūnā notiek tai raksturīgo vielu sintēze, kas ir vai nu būvmateriāls jaunizveidotām struktūrām, nevis nolietotām, vai fermenti, kas piedalās bioķīmiskās reakcijās.
Organelles ar aizsargājošām un gremošanas funkcijām
Lizosomas Šie organoīdi ir zināmi kopš 20. gadsimta 50. gadiem, kad Beļģijas bioķīmiķis de Duve aknu šūnās atklāja mazas granulas, kas satur hidrolītiskus
Organelles, kas iesaistītas šūnas enerģijas piegādē
Lielākā daļa šūnu funkciju ir saistīta ar enerģijas patēriņu. Dzīvā šūna veido to pastāvīgi notiekošo redoksprocesu rezultātā
Organoīdi, kas iesaistīti šūnu dalīšanās un kustībā
Tie ietver šūnu centru un tā atvasinājumus - cilijas un flagellas. Šūnu centrs Šūnu centrs atrodas dzīvnieku šūnās un dažās
Praktiskais darbs Nr. 1
1. Pastāvīgā preparāta "Golgi komplekss mugurkaula ganglija šūnās" mikroskopiskā analīze
Ribosomas
Tie tiek atklāti, izmantojot elektronu mikroskopiju, visu pro- un eikariotu organismu šūnās, to izmērs ir 8-35 nm, tie atrodas blakus endoplazmas retikuluma ārējai membrānai. Ribosomās to veic ar
Granulēts endoplazmatiskais tīklojums
Apsveriet raupja endoplazmas retikuluma submikroskopisko struktūru uz elektronu mikrogrāfa. Tiek atklāti trīs badā nūjas aizkuņģa dziedzera acināro šūnu reģioni. Pirms
Citoplazmas mikrotubulas
Citoplazmas kanāliņi ir atrodami visu dzīvnieku un augu organismu šūnās. Tie ir cilindriski, pavedieniem līdzīgi veidojumi, kuru garums ir 20-30 mikroni, 1
Mitotiskā aktivitāte audos un šūnās
Pašlaik ir pētīti daudzu dzīvnieku un augu audu mitotiskie cikli un mitotiskās aktivitātes veids. Izrādījās, ka katram audam ir noteikts mitotiskās aktivitātes līmenis. Par m
Mitoze (netieša dalīšanās) sīpolu sakņu šūnās
Pie maza mikroskopa palielinājuma atrodiet sīpola gala vairošanās zonu, redzes lauka centrā novietojiet zonu ar skaidri redzamām aktīvi sadalošām šūnām. Pēc tam pielāgojiet zāles lielam palielinājumam.
Amitoze (tieša dalīšanās) peles aknu šūnās
Pārbaudiet peles aknu šūnas ar lielu palielinājuma mikroskopu. Preparāta šūnām ir daudzveidīga forma. Nesadalošās šūnās kodols ir noapaļots ar kodolu. Dalot šūnas, kas sākušas dalīties
Syncarion olšūnas apaļtārps
Pie maza mikroskopa palielinājuma atrodiet apaļo tārpu dzemdes daļu, kas piepildīta ar folikulām ar olām. Apskatiet preparātu lielā palielinājumā. Citoplazma olšūnās samazinās un atslāņojas apmēram
DNS un RNS struktūra un funkcija. Gēnu struktūra un pro- un eikariotu gēnu ekspresijas regulēšana. Olbaltumvielu biosintēzes posmi
2. Mācīšanās mērķi: Zināt: - ķīmiskais sastāvs un nukleīnskābju organizācijas īpatnības; - atšķirības starp DNS un RNS;
Pazīmju pārmantošanas likumsakarības monohibrīdā šķērsošanā. Alēlisko gēnu mijiedarbības veidi
2. Mācīšanās mērķi: Zināt: - monohibrīda šķērsošanas modeļus; - I un II Mendela likumi; - mijiedarbības veidi
Pazīmju patstāvīgas mantošanas likums. Nelielu gēnu mijiedarbība
2. Mācību mērķi: Zināt: - di- un polihibrīdās šķērsošanas modeļus; - III Mendeļa likums; - mijiedarbības veidi
Mainīgums kā dzīvo lietu īpašība, tās formas. Fenotipiska (modifikācija vai nepārmantota) mainība. Genotipa mainīgums
2. Mācīšanās mērķi: Zināt: - mainīguma galvenās formas; - gūt priekšstatu par atzīšanas iespiešanos un izteiksmīgumu
Studentu patstāvīgs darbs skolotāja uzraudzībā
Praktiskais darbs Pazīmes mainīguma pakāpes un variācijas koeficienta noteikšana atkarībā no vides apstākļiem.
Ciltsrakstu analīze
Ne visas ģenētikas metodes ir piemērojamas, analizējot noteiktu pazīmju mantojumu cilvēkiem. Tomēr, pētot vairāku radinieku paaudžu fenotipus, ir iespējams noteikt mantojuma būtību
Dvīņu metode cilvēka ģenētikas izpētei
Dvīņu metode ļauj novērtēt ģenētisko un vides faktoru relatīvo lomu konkrētas pazīmes vai slimības attīstībā. Dvīņi ir monozigoti (identiski) un dizigotiski (laiki
Dermatoglifiskā metode cilvēka ģenētikas izpētei
Dermatoglifiskā analīze ir pirkstu, plaukstu un pēdu papilāru modeļu izpēte. Šajās ādas vietās ir lielas dermas papillas, un epidermas, kas tos pārklāj, veido g
Citogenētiskā metode cilvēka ģenētikas pētījumos
Starp daudzajām cilvēka iedzimtās patoloģijas izpētes metodēm svarīgu vietu ieņem citoģenētiskā metode. Izmantojot citoģenētisko metodi, ir iespējams analizēt iedzimto materiālo bāzi
Hromosomu komplekta izpēte
To var veikt divos veidos: 1) ar tiešu metodi - metafāzes hromosomu izpēte dalošās šūnās, piemēram, kaulu smadzenēs (ir
Praktiskais darbs
1. Demonstrācijas preparāta "Cilvēka kariotips" apskate citoģenētiskajā laboratorijā Ar X90 palielinājumu redzes laukā ir redzami leikocīti
Kariotipa analīze pacientiem ar hromosomu slimībām (pēc fotogrāfijām)
Nr. 1. trisomija 13. hromosomā (Patau sindroms). 47. kariotips, +13. Nr. 2. trisomija 18. hromosomā (Edvardsa sindroms). 47. kariotips, +18. Nr. 3. trisomija 21. hromosomā (Dauna slimība).
Pirkstu nospiedumu analīze
Lai izveidotu savus pirkstu nospiedumus, jums ir nepieciešams šāds aprīkojums: fotorullītis, stikls 20x20 cm2 platībā, putuplasta gumijas gabals, tipogrāfijas tinte (vai līdzīga
Kariotipa citoģenētiskā analīze (ar metafāzes plākšņu mikrogrāfiem)
1. Ieskicējiet metafāzes plāksni. 2. Aprēķiniet kopējo hromosomu skaitu. 3. Identificējiet A grupas hromosomas (3 lielu metacentrisku hromosomu pāri), B (divus lielu
Ātra metode X-dzimuma hromatīna izpētei mutes gļotādas epitēlija kodolos
Pirms skrāpēšanas paņemšanas pacientam tiek lūgts ar zobiem sakost vaigu gļotādu un noslaucīt vaiga iekšējo virsmu ar marles salveti. Šī procedūra ir nepieciešama, lai noņemtu iznīcinātās šūnas, g
Iedzīvotāju statistikas metode
Populācija ir vienas sugas indivīdu kopums, kas ilgstoši apdzīvo vienu teritoriju, ir relatīvi izolēts no citām noteiktas sugas indivīdu grupām, brīvi krustojas savā starpā un dod n
Bioķīmiska metode
Bioķīmisko metožu pamatā ir fermentu sistēmu aktivitātes izpēte (vai nu ar paša fermenta aktivitāti, vai arī ar šī fermenta katalizēto reakcijas galaproduktu daudzumu). Bioķīmija
Molekulārā ģenētiskā metode
Visu molekulāri ģenētisko metožu pamatā ir DNS struktūras izpēte. DNS analīzes posmi: 1. DNS izolēšana no šūnām, kas satur kodolus (asinis
DNS sintēzes polimerāzes ķēdes reakcija
Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir DNS amplifikācijas (reprodukcijas) metode in vitro, ar kuras palīdzību dažu stundu laikā ir iespējams identificēt un pavairot interesējošo DNS fragmentu ar izmēru 80
Nē. Pilns vārds Genotips Ivanovs AA Petrovs Aa
Novērotās genotipu un alēļu frekvences
Genotipi, alēles Gadījumu skaits Biežums (daļas) AA 1/5 = 0,2 Aa
Novērotie un paredzamie genotipu un alēļu biežumi
Novērotais gadījumu skaits Novērotais biežums Paredzamais AA biežums (p2)
Novērotās genotipu un alēļu frekvences
# P / p Spēja sarullēt mēli mēģenē Es varu (jā) A_ genotipi
FISH paņēmiens - fluorescējoša in situ hibridizācija, tika izstrādāta 1980. gadu vidū un tiek izmantota, lai noteiktu specifisku DNS sekvenču klātbūtni vai trūkumu hromosomās, kā arī alfa satelīta DNS, kas lokalizēta 6. hromosomas centromerā, CEP6 (6p11 .1-q11. Viens).
Tas deva ievērojamas izmaiņas diagnozē. onkoloģiskās slimības melanocītiskā ģenēze notika saistībā ar audzēja antigēnu noteikšanu. Uz ļaundabīga fona mutāciju nosaka trīs antigēnos: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) un CMM1 (1p). Šajā sakarā liela nozīme ir objektīvas diferenciāldiagnozes iespējai, kuras pamatā ir melanocītu ādas audzēju ģenētisko īpašību noteikšana. agrīna diagnostika melanoma un tās prekursori Kodolā ar normālu pētīto gēnu kopumu un 6. hromosomu ir divi RREB1 gēni, kas iekrāsoti sarkanā krāsā, divi MYB gēni, dzelteni, divi CCND1 gēni, kas izcelti zaļā krāsā, un divi 6. hromosomas centromeri, norādīts zilā krāsā. Diagnostikas nolūkos tiek izmantoti fluorescējoši paraugi.
Reakcijas rezultātu novērtēšana: tiek saskaitīts sarkanā, dzeltenā, zaļā un zilā signālu skaits katra parauga 30 kodolos, noteikti četri dažādu ģenētisko traucējumu variantu parametri, kuros paraugs ģenētiski atbilst melanomai. Piemēram, paraugs atbilst melanomai, ja vidējais CCND1 gēna skaits uz kodolu ir ≥ 2,5. To pašu principu izmanto, lai novērtētu citu gēnu kopiju skaitu. Zāles tiek uzskatītas par FISH pozitīvām, ja ir izpildīts vismaz viens no četriem nosacījumiem. Paraugus, kuros visi četri parametri ir zem robežvērtības, uzskata par FISH negatīviem.
Specifisku DNS sekvences noteikšana hromosomās tiek veikta biopsiju vai ķirurģiskā materiāla daļās. Praksē FISH reakcija izskatās šādi: testa materiāls, kas satur DNS melanocītu kodolos, tiek apstrādāts, lai daļēji iznīcinātu tā molekulu, lai salauztu divšķiedru struktūru un tādējādi atvieglotu piekļuvi vēlamajam gēnu reģionam. Paraugus klasificē pēc piestiprināšanas vietas DNS molekulai. FISH reakcijas materiāls klīniskajā praksē ir parafīna audu daļas, uztriepes un izdrukas.
FISH reakcija ļauj atrast izmaiņas, kas notikušas DNS molekulā gēna kopiju skaita pieauguma, gēna zuduma, hromosomu skaita izmaiņu un kvalitatīvo izmaiņu rezultātā - gēnu loku kustība. gan vienā, gan starp divām hromosomām.
Lai apstrādātu datus, kas iegūti, izmantojot FISH reakciju, un izpētītu saistību starp triju pētījumu grupu gēnu kopiju skaitu, tiek izmantots Spīrmena korelācijas koeficients.
Melanomu raksturo kopiju skaita pieaugums salīdzinājumā ar nevus un displastisko nevus.
Vienkāršā nevus, salīdzinot ar displastisko nevus, ir mazāk kopiju skaita noviržu (t.i., normālāku kopiju numuru).
Lēmumu koki tiek izmantoti, lai izveidotu lēmumu noteikumus, lai prognozētu, vai paraugs pieder noteiktai klasei (vienkāršu un displastisku nevu diferenciāldiagnoze). Šī pieeja ir veiksmīgi darbojies praksē, un šīs metodes piemērošanas rezultātus (atšķirībā no daudzām citām metodēm, piemēram, neironu tīkliem) var vizuāli interpretēt, veidojot lēmumu pieņemšanas noteikumus vienkāršu, displastisku nevi un melanomas diferencēšanai. Sākotnējie dati visos gadījumos bija četru gēnu kopiju skaits.
Diferenciāldiagnostikas lēmuma noteikšanas konstruēšanas problēma ir sadalīta vairākos posmos. Pirmajā posmā melanoma un nevus tiek diferencētas, neņemot vērā nevus veidu. Nākamajā posmā tiek izveidots lēmuma noteikums, lai nošķirtu vienkāršas un displastiskas nevus. Visbeidzot, pēdējā posmā ir iespējams izveidot "lēmumu koku", lai noteiktu displastiskās nevus displāzijas pakāpi.
Šāds nevi klasifikācijas problēmas sadalījums apakšuzdevumos ļauj sasniegt augstu prognozēšanas precizitāti katrā posmā. Ieejas dati “lēmumu koka” izveidošanai ir dati par četru gēnu kopiju skaitu pacientiem ar melanomas diagnozi un pacientiem ar nemelanomas diagnozi (pacientiem ar dažāda veida nevus - vienkāršu un displastisku). Katram pacientam ir dati par 30 šūnu gēnu kopiju skaitu.
Tādējādi diagnozes prognozēšanas problēmas sadalīšana vairākos posmos ļauj izveidot augstas precizitātes lēmumu noteikumus ne tikai melanomas un nevus atšķiršanai, bet arī nevus veida noteikšanai un displāzijas pakāpes prognozēšanai displastiskajam nevus. Uzbūvētie "lēmumu koki" ir vizuāls veids, kā prognozēt diagnozi, pamatojoties uz datiem par gēnu kopijām, un tos var viegli izmantot klīniskajā praksē, lai diferencētu labdabīgas, pirms ļaundabīgas un ļaundabīgas melanocītiskas ādas neoplazmas. Ierosinātais papildu metode diferenciāldiagnoze ir īpaši svarīga milzīgu iedzimtu pigmentētu nevus un displastisku nevus izgriešanai pacientiem bērnība, kopš kura laika šādi pacienti vēršas medicīnas iestādes ir liels diagnostisko kļūdu procents. Aprakstītās metodes izmantošanas rezultāti ir ļoti efektīvi; ieteicams tos izmantot pigmentētu ādas audzēju diagnostikā, īpaši pacientiem ar FAMM sindromu.
Pirmsdzemdību diagnostikas invazīvās metodes ļauj ne tikai ieskatīties nākotnē un droši prognozēt, vai nedzimušais bērns gaida slimības, kas saistītas ar intrauterīnām malformācijām, bet arī noskaidrot iedzimtu patoloģiju būtību un cēloņus.
Tomēr jebkurai informācijai ir vērtība tikai tad, kad tā ir savlaicīga. Runājot par augļa attīstības stāvokli, testa rezultātu iegūšanas ātrums kļūst vitāli svarīgs.
Tāpēc FISH metode, kas ļauj pēc iespējas ātrāk novērtēt visbiežāk sastopamo attīstības patoloģiju klātbūtni embrijā, ir ļoti pieprasīta ģenētiskajā diagnostikā.
FISH ir saīsinājums, kas izskaidro tehnoloģijas būtību hromosomu anomāliju - fluorescences in situ hibridizācijas - fluorescējošas hibridizācijas noteikšanai "mājas" vidē.
Šis paņēmiens, ko pagājušā gadsimta 70. gadu beigās ierosināja J. Goll un M.-L. Pardew pamatā ir iespēja atjaunot nukleīnskābes fragmentu (DNS vai RNS) izvietojuma secību pēc to denaturēšanas.
Autori ir izstrādājuši metodi, kas ļauj, izmantojot mākslīgi izveidotu iezīmētu DNS zondu (zondes) un analīzei ņemtu citoģenētisko materiālu hibridizāciju in situ, noteikt interesējošo hromosomu kvantitatīvās un kvalitatīvās novirzes.
Pagājušā gadsimta beigās pēc veiksmīgas fluorescējošu krāsu izmantošanas DNS zondu krāsošanai FISH metode ieguva savu nosaukumu un kopš tā laika ir intensīvi uzlabota un daudzveidīga.
Mūsdienu FISH analīzes metodes cenšas nodrošināt, ka vienā hibridizācijas procedūrā ir iespējams iegūt vispilnīgāko informāciju savāktā ģenētiskā materiāla analīzei.
Fakts ir tāds, ka vienu reizi pēc hibridizācijas var noteikt tikai ierobežotu tā paša citoģenētiskā materiāla hromosomu skaitu. Spēja atkārtoti hibridizēt DNS virknes laiku pa laikam samazinās.
Tāpēc šobrīd ģenētiskajā diagnostikā visbiežāk tiek izmantota hibridizācijas metode in situ, lai ātri atbildētu uz jautājumiem par pieejamajām, visbiežāk sastopamajām aneuploīdijām 21, 13, 18 hromosomām, kā arī dzimuma hromosomām X, Y.
Jebkurš audu vai šūnu paraugs ir piemērots FISH analīzei.
Pirmsdzemdību diagnozē tie var būt asinis, ejakulācija vai asins paraugi.
Rezultātu iegūšanas ātrumu nodrošina fakts, ka šūnas, kas iegūtas no analīzei paņemtā materiāla, nav jākultivē barības vielu barotnēs, panākot to dalīšanos līdz vajadzīgajam daudzumam, kā tas ir klasiskajā kariotipēšanas metodē.
Izvēlētais materiāls tiek īpaši sagatavots, lai iegūtu koncentrētu tīru šūnu suspensiju. Tālāk tiek veikts DNS parauga un testa parauga dabiskās DNS denaturēšanas process uz vienpavediena stāvokli un hibridizācijas process, kura laikā iekrāsotās DNS zondes inkubē ar parauga DNS.
Tādējādi tiek vizualizētas vēlamās (iekrāsotās) hromosomas šūnā, novērtēts to skaits, ģenētisko struktūru struktūra utt. Īpaša fluorescences mikroskopa okulārs ļauj pārbaudīt gaismas DNS virknes.
Pašlaik FISH metodi plaši izmanto diagnostikas nolūkos, lai noteiktu ģenētiskās slimības, hromosomu novirzes reproduktīvajā medicīnā, onkoloģijā, hematoloģijā, bioloģiskajā dozimetrijā utt.
Kā tiek izmantota augļa FISH diagnostika?
Reproduktīvās medicīnas jomā FISH metodi kā vienu no molekulārās citoģenētiskās diagnostikas metodēm izmanto visos posmos.
- pāris.
Lai noteiktu nākotnes vecāku kariotipu, tas tiek veikts vienu reizi, jo cilvēka genoms visā dzīvē nav mainījies.
Pārī karotipēšana pirms bērna ieņemšanas palīdzēs noteikt, vai vecāki ir iedzimtu, tostarp slēptu, ģenētisko patoloģiju nesēji. Kā arī vispārējais stāvoklis nākamo māšu un tēvu genoms, kas var ietekmēt mazuļa ieņemšanas un grūtniecības nēsāšanas panākumus.
Diagnoze ar FISH metodi šajā gadījumā bieži darbojas kā papildu pārbaude klasiskajai kariotipizēšanai, kad testa materiālā (vecāku venozās asinīs) tiek konstatētas hromosomu patoloģijas, ja ir aizdomas par mozaīku.
Papildu pārbaude ar FISH metodi droši apstiprinās vai noliegs aizdomas par novirzi nākamā vecāka šūnās.
- Ejakulēt pētījumus.
Tas ir norādīts grūtībām ar reprodukciju pāros saskaņā ar "vīriešu faktoru". Spermas analīze, izmantojot FISH metodi, novērtēs spermatozoīdu līmeni, kas ir patoloģisks hromosomu komplektā, kā arī noteiks, vai vīrietis ir ar dzimumu saistītas ģenētisko slimību nesējs.
Ja pāris vēlāk plāno grūtniecību ar IVF palīdzību, FISH ejakulāta analīze atlasīs augstākās kvalitātes spermu olšūnas apaugļošanai.
- Ar IVF.
Preimplantācijas ģenētiskajai diagnostikai (PGD). Pamatojoties uz vecāku kariotipa pētījumu rezultātiem, tiek noteiktas iespējamās hromosomu, ģenētiskās novirzes, kuras var pārnest uz embriju.
Pateicoties FISH-diagnostikas iespējām, izveidoto embriju ģenētiskās veselības izpēti var veikt dažu stundu laikā pirms pārvietošanas uz dzemdes dobumu, lai nodrošinātu grūtniecības iestāšanos ar zināmu veselīgu augli.
Turklāt PGD iespējas ļauj noteikt embriju dzimumu un, ja nepieciešams, "pasūtīt" nedzimušā bērna dzimumu.
- Grūtniecības laikā.
Pirmsdzemdību diagnostikā: Medicīniskie centri papildus augļa šūnu klasiskajai ģenētiskajai pārbaudei (kariotipizēšana) parasti piedāvā augļa šūnu FISH analīzi, kas iegūta, izmantojot parauga koriāna augļa paraugus, amniocentēzi vai kordocentēzi.
Šī metode ir neaizstājama, ja jums ātri jāsaņem atbilde par visbiežāk sastopamo augļa hromosomu defektu klātbūtni: trisomija 21, 18, 13 hromosomām, aberācijas X un Y hromosomās, dažreiz arī aneuploīdijas 14 (vai 17) , 15, 16 hromosomas.
ZIVIS analīzes priekšrocības
FISH ģenētiskā analīze, lai arī tā joprojām ir palīgmetode hromosomu patoloģiju diagnosticēšanai, tomēr tās lietderība nosaka nenoliedzamas priekšrocības:
- rezultātu iegūšanas ātrums attiecībā uz pārbaudītajām hromosomām - dažu stundu laikā - ne vairāk kā 72.
Tas var būt svarīgi, ja grūtniecības liktenis ir atkarīgs no ģenētiķu diagnozes;
- augsta jutība un FISH metodes ticamība - veiksmīga analīze ir iespējama ar nenozīmīgu biomateriāla daudzumu - pietiek ar vienu šūnu, rezultātu kļūda nav lielāka par 0,5%.
Tas var būt svarīgi, ja šūnu skaits sākotnējā paraugā ir ierobežots, piemēram, ja to sadalījums ir vājš.
- FISH diagnostikas iespēja jebkurā grūtniecības stadijā (no 7. nedēļas) un pēc jebkura bioloģiskā parauga: koriona fragmenti, augļa šķidrums, augļa asinis utt.
Kur jūs varat noteikt diagnozi ar FISH metodi?
Maskavā FISH metodi augļa hromosomu patoloģiju pirmsdzemdību diagnostikai izmanto šādos medicīnas centros:
Parasti klīnikas piedāvā FISH diagnostikas pakalpojumu kā daļu no augļa pilnīgas kariotipēšanas, izmantojot invazīvu iejaukšanos par papildu samaksu. Un, kā likums, nākamie vecāki piekrīt piemaksāt, jo, pateicoties FISH metodei, pāris dienu laikā jūs varat uzzināt vissvarīgāko par savu mazuli
FISH tests ir viena no modernākajām hromosomu kopas analīzes metodēm. Pats saīsinājums "FISH" tika izveidots no tehnikas angliskā nosaukuma - fluorescējoša in situ hibridizācija. Šis tests ļauj jums ar lielu precizitāti izpētīt šūnas ģenētisko materiālu (ieskaitot specifiskus gēnus un to segmentus).
Šo metodi tagad izmanto, lai diagnosticētu dažus vēža audzēju veidus, jo ļaundabīgu šūnas transformāciju izraisa izmaiņas tās genomā. Attiecīgi, konstatējot raksturīgas anomālijas gēnos, ar lielu noteiktību ir iespējams šo šūnu klasificēt kā vēža. Turklāt FISH testu izmanto arī, lai apstiprinātu jau izveidotu diagnozi, kā arī iegūtu papildu datus par iespēju izmantot īpašas ķīmijterapijas zāles, lai veiktu ķīmijterapiju krūts vēža ārstēšanai un noskaidrotu slimības prognozi.
Labs FISH testa izmantošanas piemērs ir tas, kad to veic pacientiem ar vēža audzējs krūts. Izmantojot šo paņēmienu, biopsijas audos tiek pārbaudītas gēna HER-2 kopijas. Ja šis gēns ir klāt, tas nozīmē, ka uz šūnu virsmas atrodas liels skaits HER2 receptoru. Viņi ir jutīgi pret signāliem, kas stimulē audzēja elementu attīstību un reprodukciju. Šajā gadījumā paveras iespēja efektīvai trastuzumaba lietošanai - šīs zāles bloķē HER2 receptoru aktivitāti, kas nozīmē, ka tas kavē audzēja augšanu.
Kā tiek veikts FISH tests?
Pārbaudes laikā no pacienta iegūtajam biomateriālam injicē īpašu krāsu, kas satur fluorescējošas etiķetes. Viņu ķīmiskā struktūra ir tāda, ka tie spēj saistīties tikai ar precīzi definētiem šūnas hromosomu kopas reģioniem. Pēc tam iekrāsoto audu paraugu ievieto fluorescences mikroskopā. Ja pētnieks atklāj hromosomu sekcijas ar tām piestiprinātām gaismas etiķetēm, tad tas ir noviržu indikators, kas norāda uz genoma izmaiņu klātbūtni saistībā ar onkoloģisko tipu.Šīs novirzes hromosomu struktūrā ir vairāku veidu:
translokācija - hromosomu materiāla daļas pārvietošanās uz jaunu pozīciju tajā pašā vai citā hromosomā;
inversija - hromosomas daļas pagriešana par 1800, neatdaloties no tās galvenā ķermeņa;
dzēšana - jebkura hromosomu reģiona zudums;
dublēšanās - hromosomas daļas kopēšana, kas noved pie tā paša gēna kopiju skaita palielināšanās šūnā.
Katram no šiem pārkāpumiem ir noteiktas diagnostikas pazīmes un informācija. Piemēram, translokācijas var norādīt uz leikēmiju, limfomu vai sarkomu klātbūtni, un gēnu dublēšanās klātbūtne palīdz izrakstīt visvairāk efektīva terapija.
Kāda ir FISH testa priekšrocība?
Salīdzinot ar tradicionālo šūnu ģenētiskā materiāla analīzi, FISH testam ir daudz lielāka jutība. Tas ļauj atklāt pat vismazākās izmaiņas genomā, kuras nevar noteikt ar citām metodēm.Vēl viena FISH testa priekšrocība ir tā, ka to var izmantot materiālam, kas nesen iegūts no pacienta. Standarta citoģenētiskai analīzei ir nepieciešams iepriekš audzēt šūnu kultūru, tas ir, ļaut pacienta šūnām vairoties laboratorijā. Šis process aizņem apmēram 2 nedēļas, un vēl viena nedēļa tiek tērēta ikdienas pārbaudes veikšanai, savukārt FISH testa rezultāts tiks saņemts tikai dažu dienu laikā.
Stabila attīstība medicīnas zinātne pakāpeniski noved pie FISH testa izmaksu samazināšanas un tā arvien plašākas ieviešanas onkologu ikdienas praksē.
Saistītie raksti
