मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण. चिकन भ्रूण के प्रायोगिक संक्रमण के तरीके देखें कि अन्य शब्दकोशों में "चिकन भ्रूण" क्या है

द्वारा तैयार: शिक्षक उग्यशेवा श्री.ई.

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वायरस की संरचना

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वायरस की संरचना ए - सरल वायरस बी - जटिल वायरस

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खतरे की डिग्री के आधार पर, वायरस को चार समूहों में विभाजित किया जाता है: समूह I: इबोला, लासा, मारबर्ग, माचुपो बुखार, चेचक और हेपेटाइटिस बी वायरस (बंदर) के रोगजनक। समूह II: आर्बोवायरस, कुछ एरेनावायरस, रेबीज वायरस, मानव हेपेटाइटिस सी और बी वायरस, एचआईवी। समूह III - इन्फ्लूएंजा वायरस, पोलियो, एन्सेफेलोमोकार्डिटिस, वैक्सीनिया। समूह IV - एडेनोवायरस, कोरोनावायरस, हर्पीसवायरस, रीओवायरस, ओंकोवायरस।

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वायरस के वर्गीकरण के सिद्धांत न्यूक्लिक एसिड का प्रकार, इसकी संरचना, प्रतिकृति रणनीति आकार, आकारिकी, विषाणु की समरूपता, कैप्सोमेरेस की संख्या, सुपरकैप्सिड की उपस्थिति। विशिष्ट एंजाइमों की उपस्थिति, विशेष रूप से आरएनए और डीएनए पॉलिमरेज़, न्यूरोमिनिडेस भौतिक और रासायनिक एजेंटों के प्रति संवेदनशीलता, विशेष रूप से ईथर इम्यूनोलॉजिकल गुण प्राकृतिक संचरण तंत्र मेजबान, उसके ऊतकों और कोशिकाओं के लिए ट्रोपिज्म पैथोलॉजी, समावेशन का गठन रोगों का लक्षण विज्ञान।

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वायरस का वर्गीकरण (आरएनए युक्त)

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वायरस का वर्गीकरण (डीएनए युक्त)

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वायरस की रासायनिक संरचना वायरस में न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन, लिपिड, ग्लाइकोलिपिड और ग्लाइकोप्रोटीन शामिल हैं। उनमें हमेशा एक प्रकार का न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या आरएनए) होता है, जो विषाणु के द्रव्यमान का 1% से 40% तक होता है। वायरल जीनोम में केवल कुछ प्रोटीनों के संश्लेषण के लिए पर्याप्त जानकारी होती है। उनका द्रव्यमान 10-15 मिलीग्राम तक पहुंचता है, जो कोशिकाओं की तुलना में 1 मिलियन गुना कम है, और उनकी लंबाई 0.093 मिमी तक है। न्यूक्लियोटाइड जोड़े की संख्या 3150 (हेपेटाइटिस बी वायरस) से 230,000 (वेरियोला वायरस) तक होती है। वायरल प्रोटीन (70-90%) को संरचनात्मक और गैर-संरचनात्मक में विभाजित किया गया है। संरचनात्मक - प्रोटीन जो परिपक्व बाह्यकोशिकीय विषाणुओं का हिस्सा होते हैं। वे कई महत्वपूर्ण कार्य करते हैं: - न्यूक्लिक एसिड को बाहरी क्षति से बचाते हैं; संवेदनशील कोशिकाओं की झिल्लियों के साथ बातचीत करते हैं; कोशिका में वायरस के प्रवेश को सुनिश्चित करते हैं; - आरएनए और डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि रखते हैं, आदि। गैर-संरचनात्मक प्रोटीन हैं परिपक्व विषाणुओं का हिस्सा नहीं, बल्कि उनके प्रजनन के दौरान बनते हैं। वे: - वायरल जीनोम की अभिव्यक्ति का विनियमन प्रदान करते हैं - वायरल प्रोटीन के अग्रदूत हैं जो सेलुलर जैवसंश्लेषण को दबा सकते हैं। विषाणु में उनके स्थान के आधार पर, प्रोटीन को कैप्सिड, सुपरकैप्सिड, मैट्रिक्स, कोर प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड से जुड़े प्रोटीन में विभाजित किया जाता है। लिपिड (15-35%) जटिल वायरस में निहित होते हैं और सुपरकैप्सिड शेल का हिस्सा होते हैं, जो इसकी दोहरी लिपिड परत बनाते हैं। वे: - वायरल आवरण को स्थिर करते हैं - बाहरी वातावरण में हाइड्रोफिलिक पदार्थों से विषाणुओं की आंतरिक परतों को सुरक्षा प्रदान करते हैं - विषाणुओं के डीप्रोटीनीकरण में भाग लेते हैं।

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वायरस का प्रजनन. इसकी विशेषताएं यह हैं कि जीनोम आरएनए और डीएनए दोनों द्वारा दर्शाए जाते हैं, वे संरचना और रूप में विविध हैं, लगभग सभी वायरल आरएनए कोशिका के डीएनए से स्वतंत्र रूप से प्रतिलिपि बनाने में सक्षम हैं। वायरस में प्रजनन की एक अंतर्निहित विघटनकारी विधि होती है, जिसमें शामिल हैं तथ्य यह है कि जीनोम और वायरस प्रोटीन के संश्लेषण को स्थान और समय में अलग किया जाता है: न्यूक्लिक एसिड कोशिका नाभिक में दोहराया जाता है, साइटोप्लाज्म में प्रोटीन, और संपूर्ण विषाणुओं का संग्रह साइटोप्लाज्मिक झिल्ली की आंतरिक सतह पर हो सकता है। वायरल प्रजनन यूकेरियोटिक कोशिकाओं में विदेशी जानकारी को फिर से बनाने की एक अनूठी प्रणाली है और वायरस की जरूरतों के लिए सेलुलर संरचनाओं की पूर्ण अधीनता सुनिश्चित करती है। वायरस के प्रजनन में कई चरण होते हैं। शुरुआती लोगों में कोशिका की सतह पर वायरस का सोखना, कोशिका में उनका प्रवेश (प्रवेश) और उनका निर्वस्त्रीकरण (डीप्रोटीनाइजेशन) शामिल हैं। देर के चरणों (वायरल जीनोम रणनीति) में वायरल न्यूक्लिक एसिड संश्लेषण, प्रोटीन संश्लेषण, वायरियन असेंबली और कोशिका से वायरल कणों की रिहाई शामिल है।

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कोशिका की सतह पर वायरस का जुड़ाव दो तंत्रों द्वारा सुनिश्चित किया जाता है: गैर-विशिष्ट और विशिष्ट। निरर्थक को इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन की ताकतों द्वारा निर्धारित किया जाता है जो वायरस और कोशिकाओं की सतह पर रासायनिक समूहों के बीच होता है जो विभिन्न चार्ज ले जाते हैं। विशिष्ट तंत्र (रिवर्स और गैर-प्रतिवर्ती सोखना) पूरक वायरल और सेलुलर रिसेप्टर्स द्वारा निर्धारित किया जाता है। वे प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट या लिपिड प्रकृति के हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस का रिसेप्टर सियालिक एसिड है। सोखने वाली जगहों पर रिसेप्टर्स की संख्या 3000 तक पहुंच सकती है। वायरस की सतह पर, रिसेप्टर्स आमतौर पर गड्ढों और दरारों के नीचे स्थित होते हैं। कोशिका में वायरस का प्रवेश कोशिका झिल्ली के विशेष क्षेत्रों में रिसेप्टर एंडोसाइटोसिस (वाइरोपेक्सिस का एक प्रकार) के तंत्र के माध्यम से होता है जिसमें उच्च आणविक भार - क्लैथ्रिन के साथ एक विशेष ब्लॉक होता है। झिल्लियाँ आक्रमण करती हैं और क्लैथ्रिन-लेपित अंतःकोशिकीय रिक्तिकाएँ बनती हैं। उनकी संख्या 2000 तक पहुंच सकती है। रिक्तिकाएं एकजुट होकर रिसेप्टोसोम बनाती हैं, और बाद वाला लाइसोसोम में विलीन हो जाता है। वायरस के सतही प्रोटीन लाइसोसोम की झिल्लियों के साथ परस्पर क्रिया करते हैं, और उनके न्यूक्लियोप्रोटीन साइटोप्लाज्म में छोड़े जाते हैं। हालाँकि, कोशिका में वायरस के प्रवेश के लिए एक और तंत्र है - झिल्ली संलयन का प्रेरण। यह एक विशेष वायरल फ़्यूज़न प्रोटीन (F- फ़्यूज़न से - फ़्यूज़न) के कारण होता है। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप, वायरल लिपोप्रोटीन आवरण कोशिका झिल्ली के साथ एकीकृत हो जाता है, और इसका जीनोम कोशिका में प्रवेश करता है। इस तरह के प्रोटीन की पहचान इन्फ्लूएंजा वायरस, पैराइन्फ्लुएंजा, रबडोवायरस आदि में की गई है।

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विषाणुओं का निर्वस्त्रीकरण एक बहु-चरणीय प्रक्रिया है, जिसके दौरान उनका न्यूक्लिक तंत्र मुक्त हो जाता है, जीनोम अभिव्यक्ति को रोकने वाले सुरक्षात्मक आवरण गायब हो जाते हैं। यह विशिष्ट क्षेत्रों - लाइसोसोम और गोल्गी तंत्र में होता है। प्रजनन के बाद के चरणों का उद्देश्य वायरल न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन का संश्लेषण करना है। प्रतिकृति का तंत्र (वायरल जीनोम का निर्माण जो पूर्ववर्ती की एक सटीक प्रतिलिपि है) न्यूक्लिक एसिड की विशेषताओं पर निर्भर करता है। यह विभिन्न प्रकार के वायरस के लिए समान नहीं है। जिन वायरस में आरएनए होता है उनमें प्रतिकृति समान पैटर्न के अनुसार होती है। एमआरएनए को मातृ आरएनए पर संश्लेषित किया जाता है, और आरएनए के मध्यवर्ती रूप वायरल जीनोम के संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में काम करते हैं। प्रतिलेखन संदेशवाहक आरएनए के निर्माण की प्रक्रिया है। यह डीएनए- या आरएनए-निर्भर आरएनए पोलीमरेज़ नामक विशेष एंजाइमों की मदद से होता है। डीएनए वायरस में सेलुलर मूल के ये एंजाइम होते हैं, जबकि आरएनए वायरस के पास अपने स्वयं के वायरस-विशिष्ट ट्रांसक्रिपटेस होते हैं। अनुवाद चरण में, आनुवंशिक जानकारी को मैसेंजर आरएनए से पढ़ा जाता है और अमीनो एसिड अनुक्रम में अनुवादित किया जाता है। यह प्रक्रिया राइबोसोम में होती है। आरएनए अणु त्रिक कोड अनुक्रम के अनुसार राइबोसोम में चले जाते हैं जिन्हें स्थानांतरण आरएनए द्वारा पहचाना जाता है। उत्तरार्द्ध विशेष क्षेत्रों में अमीनो एसिड ले जाता है।

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वायरस की खेती चिकन भ्रूण 6-12 दिन की उम्र। संक्रमण के तरीके - खुला, बंद

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वायरस की खेती सेल कल्चर: - मानव भ्रूण, बंदर गुर्दे, चिकन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट, आदि की प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड संस्कृतियां; द्वितीयक संस्कृतियों के रूप में कई मार्गों में विकसित होने में सक्षम; प्रत्यारोपण योग्य कोशिकाएँ; वे कोशिका संस्कृतियाँ हैं जिन्होंने असीमित वृद्धि और प्रजनन की क्षमता हासिल कर ली है; वे ट्यूमर से या सामान्य मानव या पशु ऊतकों से प्राप्त होते हैं जिनमें एक परिवर्तित कैरियोटाइप होता है। हेला (सरवाइकल कार्सिनोमा) हेप-2 (मानव स्वरयंत्र कार्सिनोमा), सीवी (मानव मौखिक कार्सिनोमा), आरडी (मानव रबडोमायोसारकोमा), आरएच (मानव भ्रूण की किडनी), वेरो (हरा बंदर की किडनी), एसपीईवी (सुअर भ्रूण की किडनी), वीएनके- 32 (सीरियाई हम्सटर किडनी)। सेल कल्चर द्विगुणित कोशिकाएं; वे एक ही प्रकार की कोशिकाओं की संस्कृतियाँ हैं, उनमें गुणसूत्रों का द्विगुणित सेट होता है और प्रयोगशाला स्थितियों में 100 उपसंस्कृतियों का सामना करने में सक्षम होते हैं। वे वायरस के टीके की तैयारी प्राप्त करने के लिए एक सुविधाजनक मॉडल हैं, क्योंकि वे विदेशी वायरस द्वारा संदूषण से मुक्त हैं, मार्ग के दौरान मूल कैरियोटाइप को बनाए रखते हैं, और उनमें ऑन्कोजेनिक गतिविधि नहीं होती है। अक्सर, वे संस्कृति रेखाओं का उपयोग करते हैं जो मानव भ्रूण फ़ाइब्रोब्लास्ट (WI-38, MRC-5, MRC-9, IMR-90), गाय, सूअर, भेड़ और इसी तरह से प्राप्त होते हैं। सेल कल्चर को जमे हुए रखा जाता है।

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कोशिका संवर्धन या उनके विकास को समर्थन देने के लिए उपयोग किए जाने वाले पोषक तत्व प्राकृतिक या सिंथेटिक (कृत्रिम) हो सकते हैं। प्राकृतिक मीडिया - मवेशियों का रक्त सीरम, सीरस गुहाओं से तरल पदार्थ, दूध हाइड्रोलिसिस उत्पाद, विभिन्न हाइड्रोलाइज़ेट (5% हेमोहाइड्रोलाइज़ेट, 0.5% लैक्टोएल्ब्यूमिन हाइड्रोलाइज़ेट) या ऊतक अर्क। उनकी रासायनिक संरचना ऐसी स्थितियाँ बनाने में मदद करती है जो मानव शरीर में मौजूद स्थितियों के समान होती हैं। ऐसे मीडिया का एक महत्वपूर्ण नुकसान उनकी गैर-मानक प्रकृति है, क्योंकि उन्हें बनाने वाले घटकों की गुणात्मक और मात्रात्मक संरचना भिन्न हो सकती है। सिंथेटिक पोषक तत्व मीडिया में यह खामी नहीं है, क्योंकि उनकी रासायनिक संरचना मानक है, क्योंकि वे कृत्रिम परिस्थितियों में विभिन्न नमक समाधानों (विटामिन, अमीनो एसिड) के संयोजन से प्राप्त होते हैं। इन सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले समाधानों में मध्यम 199 (प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड और निरंतर सेल संस्कृतियों की खेती), ईगल माध्यम (इसमें अमीनो एसिड और विटामिन का न्यूनतम सेट होता है और इसका उपयोग द्विगुणित सेल लाइनों और निरंतर कोशिकाओं की खेती के लिए किया जाता है), ईगलएमईएम माध्यम (खेती) शामिल हैं विशेष रूप से मांग वाली सेल लाइनों की), सॉल्यूशन हैंक्स, जिसका उपयोग कल्चर मीडिया, वॉशिंग सेल आदि बनाने के लिए किया जाता है।

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प्रयोगशाला पशुओं का संक्रमण. विषाणु विज्ञान में वायरस को अलग करने और पहचानने, विशिष्ट एंटीवायरल सीरा प्राप्त करने, वायरल रोगों के रोगजनन के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने, रोगों से निपटने और उनकी रोकथाम के तरीकों को विकसित करने के लिए कई प्रयोगशाला जानवरों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। सबसे अधिक इस्तेमाल विभिन्न उम्र (दो दिन पुराने), सफेद चूहे, गिनी सूअर, खरगोश, गोफर, कॉटनटेल चूहे, बंदर और अन्य के सफेद चूहे हैं।

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जानवरों को संक्रमित करने के विभिन्न तरीके हैं, जो वायरस की प्रकृति और रोग की नैदानिक ​​तस्वीर पर निर्भर करते हैं। परीक्षण सामग्री को प्रशासित किया जा सकता है: - मुंह के माध्यम से - श्वसन पथ में (साँस लेना, नाक के माध्यम से) - त्वचीय - इंट्राडर्मल - चमड़े के नीचे, इंट्रामस्क्युलर - अंतःशिरा - इंट्रापेरिटोनियल - इंट्राकार्डियक - स्कारिफाइड कॉर्निया पर - आंख के पूर्वकाल कक्ष में - मस्तिष्क में.

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बैक्टीरियोफेज (फेज) (प्राचीन ग्रीक φᾰγω से - "मैं खा जाता हूं") वायरस हैं जो बैक्टीरिया कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से संक्रमित करते हैं। अक्सर, बैक्टीरियोफेज बैक्टीरिया के अंदर गुणा करते हैं और उनके लसीका का कारण बनते हैं। आमतौर पर, बैक्टीरियोफेज में एक प्रोटीन कोट और सिंगल- या डबल-स्ट्रैंडेड न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या, कम सामान्यतः, आरएनए) की आनुवंशिक सामग्री होती है। कण का आकार लगभग 20 से 200 एनएम है। फ्रांसीसी-कनाडाई माइक्रोबायोलॉजिस्ट डी'हेरेल, फ्रेडरिक ट्वोर्ट से स्वतंत्र रूप से, फेलिक्स ने 3 सितंबर, 1917 को बैक्टीरियोफेज की खोज की सूचना दी। इसके साथ ही, यह ज्ञात है कि 1898 में रूसी माइक्रोबायोलॉजिस्ट निकोलाई फेडोरोविच गामालेया ने पहली बार एक प्रत्यारोपण योग्य एजेंट के प्रभाव में बैक्टीरिया (एंथ्रेक्स बेसिलस) के लसीका की घटना देखी थी। जीवन चक्र एक जीवाणु कोशिका के साथ अंतःक्रिया के प्रारंभिक चरण में शीतोष्ण और विषाणु बैक्टीरियोफेज का चक्र एक ही होता है। फ़ेज़-विशिष्ट सेल रिसेप्टर्स पर बैक्टीरियोफेज का सोखना। मेजबान कोशिका में फेज न्यूक्लिक एसिड का इंजेक्शन। फ़ेज़ और बैक्टीरियल न्यूक्लिक एसिड की सह-प्रतिकृति। कोशिका विभाजन। इसके अलावा, बैक्टीरियोफेज दो मॉडलों के अनुसार विकसित हो सकता है: लाइसोजेनिक या लाइटिक पथ। कोशिका विभाजन के बाद शीतोष्ण बैक्टीरियोफेज प्रोफ़ेज अवस्था (लाइसोजेनिक मार्ग) में होते हैं। विषाणु बैक्टीरियोफेज लिटिक मॉडल के अनुसार विकसित होते हैं: फेज का न्यूक्लिक एसिड फेज एंजाइमों के संश्लेषण को निर्देशित करता है, इसके लिए बैक्टीरिया प्रोटीन-संश्लेषण उपकरण का उपयोग करता है। फ़ेज़ किसी न किसी तरह से मेजबान डीएनए और आरएनए को निष्क्रिय कर देता है, और फ़ेज़ एंजाइम इसे पूरी तरह से तोड़ देते हैं; फ़ेज़ का आरएनए प्रोटीन संश्लेषण के लिए सेलुलर तंत्र को "अधीनस्थ" करता है। फ़ेज़ न्यूक्लिक एसिड नए आवरण प्रोटीनों की प्रतिकृति बनाता है और उनके संश्लेषण को निर्देशित करता है। नए फ़ेज़ कण फ़ेज़ न्यूक्लिक एसिड के चारों ओर प्रोटीन शेल (कैप्सिड) के सहज स्व-संयोजन के परिणामस्वरूप बनते हैं; लाइसोजाइम का संश्लेषण फेज आरएनए के नियंत्रण में होता है। कोशिका लसीका: लाइसोजाइम के प्रभाव में कोशिका फट जाती है; लगभग 200-1000 नए फ़ेज़ जारी किए जाते हैं; फ़ेज़ अन्य जीवाणुओं को संक्रमित करते हैं। 1 - सिर, 2 - पूंछ, 3 - न्यूक्लिक एसिड, 4 - कैप्सिड, 5 - "कॉलर", 6 - पूंछ का प्रोटीन आवरण, 7 - पूंछ तंतु, 8 - रीढ़, 9 - बेसल प्लेट

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मुर्गी भ्रूण का संक्रमण मुर्गी भ्रूण का उपयोग वायरस और माइकोप्लाज़्मा की खेती के लिए किया जाता है। वायरस के प्रकार और संक्रमण की विधि के आधार पर भ्रूण का उपयोग 8-14 दिनों की उम्र में किया जाता है; कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली में, एलांटोइक और एमनियोटिक गुहा में, जर्दी थैली में। संक्रमण से पहले, भ्रूण की व्यवहार्यता एक ओवोस्कोप में निर्धारित की जाती है और वायु थैली की सीमाओं को खोल पर एक पेंसिल से चिह्नित किया जाता है। मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण सख्ती से सड़न रोकने वाली स्थितियों के तहत एक बॉक्स में उबालकर निष्फल उपकरण का उपयोग करके किया जाता है। वायु स्थान के ऊपर के खोल को अल्कोहल से पोंछा जाता है, लौ में जलाया जाता है, 2% आयोडीन घोल से चिकना किया जाता है, फिर से अल्कोहल से पोंछा जाता है और जला दिया जाता है। 0.05 - 0.2 मिली की मात्रा में वायरल सामग्री को ट्यूबरकुलिन सिरिंज या पाश्चर पिपेट के साथ कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर लगाया जाता है। थर्मोस्टेट में 48-72 घंटों के ऊष्मायन के बाद भ्रूण को विच्छेदित किया जाता है। क्रोलेंटोइक झिल्ली में वायरस की उपस्थिति निर्धारित की जाती है: 1. विभिन्न आकृतियों के सफेद अपारदर्शी धब्बों द्वारा; 2. रक्तगुल्म प्रतिक्रिया में.

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वायरोलॉजिकल अध्ययन के लिए, 7-12 दिन पुराने चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है ( अधिकतर 9-12 दिन, कभी-कभी 5-12 दिन)।

संक्रमण से पहले भ्रूण की व्यवहार्यता निर्धारित की जाती है। ओवोस्कोपी के दौरान, जीवित भ्रूण गतिशील होते हैं और संवहनी पैटर्न स्पष्ट रूप से दिखाई देता है। वायुकोश की सीमाओं को एक साधारण पेंसिल से चिह्नित किया जाता है। आयोडीन या अल्कोहल के साथ वायु स्थान के ऊपर के खोल का पूर्व-उपचार करने के बाद, बाँझ उपकरणों का उपयोग करके चिकन भ्रूण को सड़न रोकने वाली परिस्थितियों में संक्रमित किया जाता है।

मुर्गी के भ्रूण को संक्रमित करने के तरीकेभिन्न हो सकते हैं: कोरियोएलैंटोइक झिल्ली में, एमनियोटिक और एलैंटोइक गुहाओं में, जर्दी थैली में और भ्रूण के शरीर में वायरस का अनुप्रयोग। संक्रमण विधि का चुनाव अध्ययन किए जा रहे वायरस के जैविक गुणों पर निर्भर करता है।

मुर्गी के भ्रूण को संक्रमित करने के दो तरीके हैं:

1) खुला - वायु थैली के ऊपर के खोल को अल्कोहल और आयोडीन से उपचारित किया जाता है, खोल को तेज कैंची से काट दिया जाता है, वायु थैली के खोल की ऊपरी शीट को हटा दिया जाता है और संक्रमण किया जाता है। छेद को एक विशेष कांच के ढक्कन या खोल से बंद कर दिया जाता है और बाँझ पिघले पैराफिन से सील कर दिया जाता है।

2) बंद - वायु थैली के ऊपर के खोल को अल्कोहल और आयोडीन से उपचारित किया जाता है, एक भेदी उपकरण के साथ खोल में एक छेद किया जाता है और नियंत्रण के तहत एक मोटी सुई के साथ एक सिरिंज का उपयोग करके 0.1-0.2 मिलीलीटर वायरस युक्त सामग्री को इंजेक्ट किया जाता है। एक ओवोस्कोप का. छेद को स्टेराइल पिघले पैराफिन से बंद कर दिया जाता है।

संक्रमित भ्रूण को 2-4 दिनों के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। फिर उन्हें अधिकतम वाहिकासंकुचन के लिए पूरे दिन में 4ºC तक ठंडा किया जाता है। खोल को पहले अल्कोहल या आयोडीन से उपचारित करके बाँझ परिस्थितियों में खोलें।

मुर्गी के भ्रूण में वायरस का संकेत भ्रूण की मृत्यु, एलांटोइक या एमनियोटिक द्रव के साथ ग्लास पर एक सकारात्मक हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया और कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर फोकल घावों ("सजीले टुकड़े") द्वारा किया जाता है।

वायरस केवल जीवित कोशिकाओं में ही पनप सकते हैं। इस प्रयोजन के लिए, किसी भी जैविक प्रणाली का उपयोग किया जाता है: पशु जीव, चिकन भ्रूण, कोशिका संस्कृतियाँ। प्रयोगशाला पशुओं का चयन करते समय, निम्नलिखित आवश्यकताओं को पूरा किया जाना चाहिए: - पशुओं को स्वस्थ होना चाहिए। मछलीघर में आने वाले नए लोगों को संगरोध में रखा जाता है (चूहों और चूहों को 14 दिनों के लिए, अन्य को 21 दिनों के लिए)। वायरल एटियलजि के अव्यक्त (छिपे हुए) संक्रमणों को बाहर करने के लिए।

सभी जानवरों के लिए निम्नलिखित आवश्यकताएं पूरी की जाती हैं: - जानवरों को इस वायरस के प्रति संवेदनशील होना चाहिए; - जानवर की उम्र बहुत महत्वपूर्ण है: युवा और नवजात शिशु सबसे संवेदनशील होते हैं, लेकिन कुछ मामलों में रोग के स्पष्ट नैदानिक ​​लक्षणों की पहचान करने के लिए वयस्क जानवरों का उपयोग किया जाता है; - जानवरों की उम्र और शरीर का वजन समान होना चाहिए; रैखिक जानवर इसके लिए बेहतर अनुकूल हैं, यानी। अंतःप्रजनन के परिणामस्वरूप प्राप्त होता है।

वायरोलॉजिकल अध्ययन के लिए, प्रयोगशाला जानवरों के चमड़े के नीचे, त्वचीय, इंट्राडर्मल, इंट्रामस्क्युलर, इंट्रापेरिटोनियल, अंतःशिरा, मौखिक, इंट्रानेसल और इंट्रासेरेब्रल संक्रमण का उपयोग किया जाता है।

विषय की सामग्री की तालिका "बैक्टीरिया की खेती। बैक्टीरिया की खेती के तरीके। कालोनियों के लक्षण।"

वायरस का पता लगाने के लिए अंग संवर्धन। वायरल संक्रमण के निदान में चिकन भ्रूण। चूज़े के भ्रूण विषाणु से संक्रमण। चिकन भ्रूण वायरस से संक्रमण के तरीके।

सभी प्रकार की कोशिकाएँ मोनोस्लोन के रूप में विकसित होने में सक्षम नहीं होती हैं; कुछ मामलों में, विभेदित कोशिकाओं को बनाए रखना केवल में ही संभव है अंग संस्कृति. यह आमतौर पर ऊतक का एक निलंबन होता है जिसका एक विशेष कार्य होता है, जिसे जीवित ऊतक संस्कृति भी कहा जाता है।

वायरल संक्रमण के निदान में चिकन भ्रूण

चिकन भ्रूण(चित्र 11-20) कुछ वायरस (उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा और खसरा) की खेती के लिए लगभग आदर्श मॉडल हैं। भ्रूण की बंद गुहा बाहर से सूक्ष्मजीवों के प्रवेश को रोकती है, साथ ही सहज वायरल संक्रमण के विकास को भी रोकती है। भ्रूण का उपयोग रोग संबंधी सामग्री से वायरस के प्राथमिक अलगाव के लिए किया जाता है; उन्हें पारित करने और संरक्षित करने के लिए, साथ ही वायरस की आवश्यक मात्रा प्राप्त करने के लिए। कुछ रोगजनक (उदाहरण के लिए, हर्पीस वायरस) विशिष्ट परिवर्तन का कारण बनते हैं (उनके द्वारा रोग को पहचाना जा सकता है)। संक्रमण कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर, एमनियोटिक या एलांटोइक गुहा में, या जर्दी थैली में होता है।

कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर वायरस का संक्रमण. आमतौर पर 10-12 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है। अंडों को संचरित प्रकाश में देखा जाता है, वायु थैली का स्थान नोट किया जाता है, और रक्त वाहिकाओं के बिना एक क्षेत्र का चयन किया जाता है। सावधानी से खोल के टुकड़े को हटा दें, बाहरी आवरण को छोड़ दें और हल्के दबाव से छील लें। फिर वायु थैली के किनारे पर एक छेद किया जाता है। इस छेद के माध्यम से सक्शन करते समय, कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली बाहरी झिल्ली से अलग हो जाती है। बैक्टीरिया और प्रोटोजोआ से मुक्त परीक्षण सामग्री को उस पर लगाया जाता है (बैक्टीरिया फिल्टर से गुजारा जाता है और जीवाणुनाशकों से उपचारित किया जाता है)। एम्नियोटिक गुहा में संक्रमण. आमतौर पर, 7-14 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है, जिसमें कोरियोनिक-एलैंटोइक झिल्ली (ऊपर देखें) के अलग होने के बाद, उद्घाटन का विस्तार किया जाता है, एमनियोटिक झिल्ली को चिमटी से पकड़ा जाता है और कोरियोनिक-एलैंटोइक झिल्ली के माध्यम से हटा दिया जाता है। इसके माध्यम से, परीक्षण सामग्री को एमनियोटिक गुहा में पेश किया जाता है।

एलैंटोइक गुहा में वायरस का संक्रमण. 10 दिन पुराने भ्रूण खोल और अंतर्निहित झिल्लियों में बने छिद्रों के माध्यम से संक्रमित होते हैं (ऊपर देखें)।

जर्दी थैली में वायरस का संक्रमण. 3-8 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है, जिसमें इस उम्र में जर्दी थैली लगभग पूरे अंडे की गुहा पर कब्जा कर लेती है। संक्रमण वायु थैली में बने छेद के माध्यम से होता है।

चावल। 11-20. एक विकासशील चूज़े के भ्रूण का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व.

चिकन भ्रूण वायरस से संक्रमण के परिणामों का अवलोकन और रिकॉर्डिंग

सामग्री का उपयोग वायरस युक्त सामग्री के रूप में किया जा सकता है अण्डे की जर्दी की थैली, एलैंटोइक और एमनियोटिक द्रव, या संपूर्ण भ्रूण, आसपास के ऊतकों के साथ टुकड़ों में काटा जाता है। कोरियोनिक-एलांटोइक झिल्ली पर विशिष्ट घावों की पहचान करने के लिए, खोल और बाहरी झिल्ली को हटा दिया जाता है। फिर झिल्ली को हटा दिया जाता है और रोगाणुहीन पानी में डाल दिया जाता है। घावों की प्रकृति का अध्ययन एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर किया जाता है।

मुर्गी भ्रूण मुर्गी भ्रूण

(सीई) - भ्रूण के विकास के विभिन्न चरणों में स्थित एक मुर्गी भ्रूण। माइक्रोबायोल में. व्यवहार में इनका उपयोग वायरस, रिकेट्सिया और कभी-कभी बैक्टीरिया के अलगाव, संवर्धन और पहचान के लिए किया जाता है। प्रयोगशाला प्रयोजनों के लिए, एक अच्छी तरह से पारदर्शी और दरार मुक्त खोल के साथ ताजा, निषेचित ईसी का चयन किया जाता है। अंडे के कुंद सिरे को अच्छी तरह हवादार इन्क्यूबेटरों या थर्मोस्टेट में 37 -37.5 डिग्री सेल्सियस, सापेक्ष आर्द्रता 63-65% पर ऊपर की ओर रखते हुए तिपाई घोंसलों में ऊष्मायन किया जाता है। संक्रमण के लिए, स्पष्ट रक्त वाहिकाओं, एक जर्दी थैली और एक मोबाइल छाया के साथ 4-13 दिन पुराने भ्रूण का चयन किया जाता है। संक्रमण से पहले, अंडे के छिलकों को अल्कोहल से उपचारित किया जाता है, जलाया जाता है और परिचय के क्षेत्र में (आमतौर पर वायु कक्ष के ऊपर) 2% आयोडीन टिंचर लगाया जाता है। सामग्री या अनुसंधान इसे खोल को खोलकर या बिना खोले, जर्दी थैली (रिकेट्सिया) में, एलांटोइक या एमनियोटिक गुहाओं (अधिकांश वायरस) में इंजेक्ट किया जाता है, और कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर लगाया जाता है। कम सामान्यतः, इसे भ्रूण के शरीर में या अंतःशिरा द्वारा इंजेक्ट किया जाता है। संक्रमित ईसी को ऐसी परिस्थितियों में और कुछ समय के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है जो सूक्ष्म जीव के प्रकार और अध्ययन के उद्देश्यों पर निर्भर करता है। संक्रमण के परिणामों पर कुछ डेटा माइक्रोस्कोप के तहत ईसी की बाहरी जांच (रक्त वाहिकाओं का इंजेक्शन, गतिशीलता की हानि, आदि) द्वारा प्राप्त किया जा सकता है। हालाँकि, ज्यादातर मामलों में, EC खोला जाता है। ऐसा करने के लिए, अल्कोहल और आयोडीन टिंचर के साथ उपचार के बाद, खोल को वायु थैली की सीमा के ऊपर काट दिया जाता है, पहले एलेंटोइक और फिर एमनियोटिक द्रव को पाश्चर पिपेट या सिरिंज के साथ चूसा जाता है, जिससे वाहिकाओं और को नुकसान से बचाया जाता है। अण्डे की जर्दी की थैली। भ्रूण और कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को खोल से हटा दिया जाता है, बाँझ व्यंजनों में रखा जाता है, और बाँझ डिस्टिलेट से धोया जाता है। पानी और निरीक्षण करें. भ्रूण और उसके तरल पदार्थों के अध्ययन का आगे का कोर्स सूक्ष्म जीव या वायरस के प्रकार और प्रयोग के उद्देश्य पर निर्भर करता है।

(स्रोत: माइक्रोबायोलॉजी शर्तों का शब्दकोश)

देखें अन्य शब्दकोशों में "चिकन भ्रूण" क्या है:

भ्रूणविषाक्तता- भ्रूणविषाक्तता, भौतिक, जैविक, रासायनिक और अन्य एजेंटों की विकासशील भ्रूण पर नकारात्मक प्रभाव डालने की क्षमता। विभिन्न पदार्थों का भ्रूणोत्पादक प्रभाव उन्हें महिलाओं के संपर्क में लाकर निर्धारित किया जाता है... ... पशु चिकित्सा विश्वकोश शब्दकोश

"मुर्गियां" के लिए अनुरोध यहां पुनर्निर्देशित किया गया है; अन्य अर्थ भी देखें. ? घरेलू मुर्गी...विकिपीडिया

मुर्गियाँ मुर्गियाँ किसी भी यार्ड के लिए एक सजावट हैं वैज्ञानिक वर्गीकरण किंगडम: पशु प्रकार: कॉर्डेटा क्लास ... विकिपीडिया

प्रयोगशाला जानवरों में वायरस का अलगाव।

प्रयोगशाला जानवरों का चुनाव वायरस के प्रकार पर निर्भर करता है। प्रयोगशाला के जानवर एक जैविक मॉडल हैं। कभी-कभी वायरस को प्रयोगशाला स्थितियों में अनुकूलित करने से पहले 3-5 "अंधा", स्पर्शोन्मुख मार्गों को पूरा करना आवश्यक होता है। हालाँकि, प्रयोगशाला के जानवर कुछ वायरस के प्रति संवेदनशील नहीं होते हैं, ऐसे में प्राकृतिक रूप से अतिसंवेदनशील जानवरों का उपयोग करना आवश्यक है। उदाहरण के लिए, स्वाइन बुखार और घोड़ों के संक्रामक एनीमिया के साथ।

प्रयोगशाला पशुओं को संक्रमित करने का उद्देश्य:

1. रोग के रोगजनन का अध्ययन करें;

2. वायरस को रोगजनक सामग्री से अलग करें;

3. प्रतिरक्षा और हाइपरइम्यून सीरम का उत्पादन;

4. टीकों का उत्पादन;

5. प्रयोगशाला स्थितियों में वायरस का रखरखाव;

6. अनुमापन, प्रति इकाई आयतन में वायरस की मात्रा निर्धारित करने के लिए;

7. तटस्थीकरण प्रतिक्रिया के मंचन के लिए जैविक मॉडल;

प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करने की विधि का चुनाव वायरस के ट्रॉपिज्म पर निर्भर करता है। इस प्रकार, न्यूरोट्रोपिक वायरस की खेती करते समय, जानवर मस्तिष्क में संक्रमित हो जाते हैं; श्वसन इंट्रानासली, इंट्राट्रैचियली; त्वचीय - चमड़े के नीचे और अंतःचर्मिक रूप से।

संक्रमण सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्टिक्स के नियमों के अनुपालन में किया जाता है।

जानवरों के शरीर में वायरस युक्त सामग्री डालने के कई तरीके हैं:

चमड़े के नीचे; - इंट्रासेरेब्रल; - इंट्राडर्मल;

इंट्रापेरिटोनियल; - इंट्रामस्क्युलर; - अंतःनेत्र;

अंतःशिरा; - इंट्रानैसल; - पौष्टिक;

संक्रमण के बाद, जानवरों को चिह्नित किया जाता है, एक अलग बक्से में रखा जाता है और 10 दिनों तक निगरानी की जाती है। संक्रमण के बाद पहले दिन किसी जानवर की मृत्यु को गैर-विशिष्ट माना जाता है और बाद में इस पर ध्यान नहीं दिया जाता है।

3 संकेत संक्रमण की प्रभावशीलता का संकेत देते हैं:

नैदानिक ​​लक्षणों की उपस्थिति

किसी जानवर की मौत

पैथोएनाटोमिकल परिवर्तन (अंग का आकार, आकार, रंग और स्थिरता)।

मुर्गी भ्रूण एक निषेचित मुर्गी अंडा है जिसमें एक भ्रूण (भ्रूण) विकसित होता है। चिकन और बटेर भ्रूण पर वायरस की खेती हाल ही में कई वायरस और कुछ बैक्टीरिया - ब्रुसेला, रिकेट्सिया, विब्रियो की खेती और निदान के लिए सबसे सरल और सबसे विश्वसनीय तरीकों में से एक के रूप में व्यापक हो गई है।

चिकन भ्रूण विकसित करने में कई मानव और पशु वायरस का संवर्धन किया जा सकता है। भ्रूणीय ऊतक, विशेष रूप से भ्रूण की झिल्लियाँ, रोगाणु उपकला ऊतकों से समृद्ध, कई वायरस के प्रसार के लिए एक अनुकूल वातावरण है। एपिथेलियोट्रोपिक गुणों (चेचक, आईएलटी, आदि) वाले वायरस कोरियोएलैंटोइक झिल्ली पर सफलतापूर्वक विकसित होते हैं, जिससे मैक्रोस्कोपिक रूप से दृश्यमान परिवर्तन होते हैं। मायक्सोवायरस (इन्फ्लूएंजा, न्यूकैसल रोग, कैनाइन डिस्टेंपर, आदि), संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस, डकलिंग हेपेटाइटिस, आर्बोवायरस आदि के विभिन्न प्रतिनिधि भ्रूण में अच्छी तरह से प्रजनन करते हैं जब सामग्री को एलेंटोइक गुहा में पेश किया जाता है। कुछ विषाणुओं को जर्दी थैली में सफलतापूर्वक संवर्धित किया जा सकता है।

लाभ:

1. आर्थिक रूप से लाभदायक, इसके अलावा अंडे आसानी से उपलब्ध होते हैं;

2. चिकन भ्रूण के विकास में सुरक्षात्मक तंत्र का अभाव होता है, क्योंकि प्रतिरक्षा प्रणाली अभी तक विकसित नहीं हुई है;

3. अंडे के छिलके वातावरण में बैक्टीरिया और वायरस को प्रवेश करने से रोकते हैं;

चिकन भ्रूण पर वायरस विकसित करने और अलग करने के लिए, बहुत सरल उपकरण की आवश्यकता होती है - एक नियमित थर्मोस्टेट या इनक्यूबेटर।

स्थितियाँ:

1. अंडे संक्रामक रोगों से मुक्त माने जाने वाले खेतों से प्राप्त किए जाते हैं;

2. मुर्गियों की सफेद नस्लों (लेगहॉर्न, रूसी व्हाइट) से चिकन भ्रूण प्राप्त करना बेहतर है, क्योंकि वे हेरफेर के प्रति अधिक प्रतिरोधी होते हैं और मामूली चोटों से नहीं मरते हैं। इसके अलावा, उनका खोल सफेद और अन्य नस्लों की तुलना में अधिक पारदर्शी है, और देखने में आसान है, जो उनके साथ काम करते समय देखने और अवलोकन के लिए सुविधाजनक है;

3. ऊष्मायन के लिए, 10 दिन से अधिक पहले दिए गए निषेचित अंडे का चयन नहीं किया जाता है;

4. असंदूषित अंडे लें, क्योंकि उन्हें ऊष्मायन से पहले धोया नहीं जा सकता है, और गंदे अंडे देखने पर कम दिखाई देते हैं (ओवोस्कोपी) और उनके साथ काम करते समय, हेरफेर प्रक्रिया के दौरान भ्रूण संक्रमित हो सकता है;

अंडों को एक इनक्यूबेटर में या थर्मोस्टेट में पानी गर्म करने और हवा की पहुंच के साथ सेते हैं, और थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के दौरान, अंडों को दिन में 2-3 बार घुमाने की जरूरत होती है और, बेहतर गैस विनिमय के लिए, 5-10 बार बाहर निकाला जाता है। हवा में मिनट. एक निश्चित आर्द्रता बनाए रखने के लिए, पानी के साथ एक बर्तन को वाष्पीकरण के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है; थर्मोस्टेट में तापमान 38° होना चाहिए।

भ्रूण का विकास ऊष्मायन के पहले दिन से ही होता है, मस्तिष्क और कंकाल का बिछाने होता है। 7-9 दिन की उम्र में मुर्गी के भ्रूण की संरचना(नोटबुक देखें).

संक्रमण के लिए अक्सर 7-12 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है। चिकन भ्रूण के साथ काम एक बाँझ कमरे-बॉक्स में सड़न रोकनेवाला के सख्त पालन के साथ किया जाता है।

मुर्गी के भ्रूण को संक्रमित करने का उद्देश्य है:

1. अस्तर को पेटेंट सामग्री से अलग करें;

2. टीकों का विकास;

3. प्रयोगशाला में वायरस को बनाए रखना;

4. वायरस का अनुमापन;

5. तटस्थीकरण प्रतिक्रिया के मंचन के लिए जैविक मॉडल;

6. वायरस हस्तक्षेप और इंटरफेरॉन उत्पादन का अध्ययन; मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण:

संक्रमण के लिए, अच्छी तरह से परिभाषित गतिशीलता वाले व्यवहार्य भ्रूण का चयन किया जाना चाहिए। संक्रमण से पहले, सभी भ्रूणों की एक अंधेरे कमरे में ओवोस्कोप का उपयोग करके सावधानीपूर्वक जांच की जाती है।

संक्रमण से पहले भ्रूण की कैंडलिंग के दौरान, एक पुगा (वायु गुहा), बड़ी रक्त वाहिकाओं का मार्ग और भ्रूण की प्रस्तुति की जगह को एक साधारण पेंसिल के साथ खोल पर रेखांकित किया जाता है, यानी खोल पर वह क्षेत्र जहां भ्रूण निकटतम होता है यह। पग का अंकन, भ्रूण की प्रस्तुति का स्थान और बड़ी रक्त वाहिकाओं का मार्ग संक्रमण के समय वायरस युक्त सामग्री को पेश करने के लिए साइट चुनते समय एक मार्गदर्शक के रूप में कार्य करता है।

संक्रमण के लिए चुने गए चिकन भ्रूणों को एक बॉक्स में स्थानांतरित किया जाता है, जहां उन पर काम किया जाता है। संक्रमण से पहले, सामग्री के परिचय स्थल पर खोल को दो बार आयोडीन युक्त अल्कोहल से उपचारित किया जाता है और जला दिया जाता है। संक्रमण की खुराक 0.1-0.2 सेमी है।

वायरस के प्रकार और संक्रमण के उद्देश्य के आधार पर ये अलग-अलग होते हैं वायरस युक्त सामग्री पेश करने की विधियाँ:

1) कोरियोएलैंटोइक झिल्ली का संक्रमण , 7-12 दिन की आयु के भ्रूणों का उपयोग न्यूरोट्रोपिक, डर्मेट्रोपिक और कुछ पैंट्रोपिक वायरस (चेचक, एन्सेफेलोमाइलाइटिस, आईएलटी, पैर और मुंह की बीमारी, रेबीज, प्लेग, आदि) के अलगाव और खेती के लिए किया जाता है। संक्रमण के 3 विकल्प हैं:

ए) पुगा खोलें और इसे कैंची से काट लें, सबशेल झिल्ली को अलग करें और सामग्री को कोरियोएलैंटोइक झिल्ली (सीएओ) पर लगाएं। फिर अंडे के छेद को एक बाँझ कांच की टोपी से सील कर दिया जाता है और टोपी के किनारों पर मोम लगा दिया जाता है;

बी) भ्रूण की प्रस्तुति के पक्ष में पूजा की सीमा पर एक सुई फ़ाइल (फ़ाइल) या एक दाँतेदार स्केलपेल के साथ खोल में लगभग 1 सेमी की लंबाई के साथ एक त्रिकोण काट लें, खोल के अनुभाग को हटा दें और चिमटी के साथ सबस्टेलर झिल्ली और सामग्री का परिचय। छेद को एक स्टेराइल कवर ग्लास से ढक दिया जाता है और किनारों को एक स्टेराइल चिपकने वाली टेप से पैराफिनाइज या सील कर दिया जाता है।

ग) जिस स्थान पर भ्रूण प्रस्तुत किया गया है उस स्थान पर एक स्केलपेल के साथ लगभग 0.5 सेमी के क्षेत्र के साथ खोल का एक छोटा सा क्षेत्र हटा दिया जाता है, फिर इस क्षेत्र में चिमटी या सुई और सामग्री के साथ उपकोश झिल्ली को हटा दिया जाता है इंजेक्ट किया जाता है. यदि सामग्री अंडे की गुहा में अच्छी तरह से फिट नहीं होती है, तो आप अंडे के खोल में छेद के माध्यम से अंडे से हवा को बाहर निकालने के लिए एक रबर बल्ब का उपयोग कर सकते हैं, और परिणामस्वरूप, एक कृत्रिम अंडा बनता है। वह स्थान जहाँ सामग्री डाली जाती है, और फिर सामग्री आसानी से डाली जाती है। खोल में छेद को चिपकने वाले प्लास्टर से ढक दिया जाता है या मोम लगा दिया जाता है।

2) एलैंटोइक गुहा में संक्रमण। यह संक्रमण विधि बहुत सरल है और इसका उपयोग कई वायरस को अलग करने के लिए किया जाता है। संक्रमण के लिए 10-11 दिन का भ्रूण लिया जाता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) संक्रमण पुगा के माध्यम से बिना काटे किया जाता है। एक सुई का उपयोग करके, पुगा के शीर्ष से पुगा की सीमा तक की दूरी को मापें, जिसे खोल पर एक पेंसिल से चिह्नित किया गया है, और सुई को चिह्नित गहराई तक डालें और कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को छेदने के लिए 0.5 सेमी और गहरा करें;

बी) सामग्री को भ्रूण की प्रस्तुति के स्थान पर एक संवहनी क्षेत्र में 3-5 मिमी की गहराई तक खोल में एक पंचर के माध्यम से सुई के साथ डाला जाता है। खोल में छेद को चिपकने वाले प्लास्टर से ढक दिया जाता है या मोम लगा दिया जाता है।

3) जर्दी थैली में संक्रमण. संक्रमण के लिए 5-8 दिन के भ्रूण का उपयोग किया जाता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) सुई को ओवोस्कोप के नियंत्रण में भ्रूण की प्रस्तुति के स्थान पर 45 डिग्री के कोण पर पूजा के किनारे से जर्दी थैली में डाला जाता है;

बी) अंडे को भ्रूण के प्रस्तुति बिंदु को नीचे की ओर रखते हुए स्टैंड पर रखा जाता है और सुई को भ्रूण की ओर ऊपर से नीचे तक लगभग 1 सेमी की गहराई तक डाला जाता है।

इंजेक्शन वाली जगह को चिपकने वाली टेप से सील कर दिया जाता है और पैराफिनाइज़ किया जाता है। 4) एम्नियोटिक गुहा में संक्रमण.संक्रमण की इस पद्धति से, वायरस एमनियोटिक द्रव के संपर्क में आने वाली विभिन्न कोशिकाओं में प्रवेश और गुणा कर सकता है। संक्रमण में आसानी के लिए, संक्रमण से 2-3 दिन पहले पग को ऊपर की ओर करके भ्रूण को सेने की सलाह दी जाती है। फिर भ्रूण और एमनियन ऊपर की ओर बढ़ते हैं और संक्रमित करना अधिक सुविधाजनक होता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) पुगा को खोलें और काट लें, चिमटी से सबशेल झिल्ली को हटा दें और एमनियन को पकड़ लें, चिमटी से एमनियन को ऊपर खींचें और 0.1 मिलीलीटर की खुराक में सामग्री को एमनियोटिक गुहा में डालें। फिर खोल में छेद को एक बाँझ कांच की टोपी से सील कर दिया जाता है और किनारों पर मोम लगा दिया जाता है;

बी) आंखों के नियंत्रण में एक अंधेरे कमरे में एक पुगा के माध्यम से एक लंबी सुई का उपयोग करके संक्रमण। एक छोटा सा क्षेत्र बनाने के लिए सुई की नोक को पहले एक समकोण पर मोड़ा जाता है। सुई को पूर्व-भ्रूण के उभार के माध्यम से आंख के नियंत्रण में डाला जाता है; इस मामले में, एक कुंद सुई के दबाव में, भ्रूण हिल जाएगा, फिर हल्के से धक्का के साथ एमनियन को छेद दिया जाता है और सुई को थोड़ा सा दबाया जाता है वापस खींच लिया। इस मामले में, भ्रूण को सुई के पीछे ऊपर की ओर बढ़ना चाहिए। फिर सामग्री पेश की जाती है.

5) भ्रूण के शरीर में संक्रमण और मस्तिष्क में संक्रमण। 7-12 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है, शरीर के विभिन्न हिस्सों में या सीधे मस्तिष्क में सामग्री डालकर संक्रमण किया जाता है। संक्रमण के लिए, पुगा को खोला जाता है और भ्रूण को चिमटी से खींच लिया जाता है। संक्रमण के इन तरीकों से, संक्रमित भ्रूणों की संख्या में से 30% या उससे अधिक की चोट से मृत्यु हो सकती है।

6) कोरियोएलैंटोइक झिल्ली की बड़ी रक्त वाहिकाओं में संक्रमण। संक्रमण की यह विधि, पिछली विधि की तरह, बहुत ही कम उपयोग की जाती है। रक्त वाहिका के साथ खोल को हटाकर सीधे रक्त प्रवाह के साथ वाहिका में सामग्री को एक पतली सुई से इंजेक्ट किया जाता है।

संक्रमण के बाद, चिकन भ्रूण को एक साधारण पेंसिल से चिह्नित किया जाना चाहिए और थर्मोस्टेट में रखा जाना चाहिए। इन्हें प्रतिदिन देखकर निगरानी की जाती है, वायरस के प्रकार के आधार पर 7-8 दिनों तक अवलोकन किया जाता है। यदि भ्रूण मर जाते हैं, तो उन्हें तुरंत थर्मोस्टेट से हटा दिया जाता है और खुलने तक रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। यदि भ्रूण पहले 14-18 घंटों के भीतर मर जाता है, तो यह चोट या रोग संबंधी सामग्री की विषाक्तता के कारण हो सकता है। इसलिए, जैसे प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करते समय, संदिग्ध मामलों में कई मार्ग बनाने और प्रत्येक सामग्री के लिए कई भ्रूण लेने की सिफारिश की जाती है।

मृत संक्रमित चिकन भ्रूणों की शव परीक्षा, या अवलोकन अवधि समाप्त होने के बाद हटा दी गई, बाँझ बॉक्सिंग स्थितियों में एसेप्टिस के सभी नियमों के साथ की जाती है। खोलने पर, खोल को अल्कोहल से उपचारित किया जाता है और जला दिया जाता है, फिर पुगा को काट दिया जाता है। खुले भ्रूण से, एलेंटोइक द्रव को पहले सावधानीपूर्वक चूसा जाता है (इसकी मात्रा लगभग 7 मिली है), फिर एमनियोटिक झिल्ली को चिमटी से वापस खींचा जाता है, पाश्चर पिपेट से छेद किया जाता है और एमनियोटिक द्रव को चूसा जाता है (इसकी मात्रा 1.0- होती है) 1.5 मिली), फिर जर्दी एकत्र की जाती है, झिल्ली हटा दी जाती है और भ्रूण। परिवर्तनों के लिए द्रव, झिल्लियों और भ्रूण की सावधानीपूर्वक जांच की जाती है। एमनियोटिक द्रव आमतौर पर पूरी तरह से साफ होता है, लेकिन संक्रमित होने पर यह धुंधला और खूनी हो सकता है। वायरस के कारण होने वाले विशिष्ट परिवर्तन कोरियोएलैंटोइक झिल्ली पर सबसे अधिक स्पष्ट होते हैं: सूजन वाले फॉसी दिखाई देते हैं, अपारदर्शी, आकार में गोल और रक्तस्राव। भ्रूण के शरीर पर रक्तस्राव हो सकता है। सभी सामग्री रोगाणुरहित कंटेनरों में एकत्र की जाती है।

वायरोलॉजी में चिकन भ्रूण का उपयोग व्यापक रूप से न केवल वायरस को अलग करने के लिए किया जाता है, बल्कि एंटीजन को जमा करने और प्राप्त करने के लिए, जीवित और मारे गए टीके तैयार करने के लिए, वायरस को टाइट्रेट करने के लिए, वायरस न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया को स्टेज करने के लिए, वायरस को कमजोर करने (कमजोर करने) के लिए, हस्तक्षेप का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है। वायरस और इंटरफेरॉन प्राप्त करना।

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